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細(xì)胞吞噬活動觀察實(shí)驗(yàn)

發(fā)布時(shí)間： 2023-01-13　　點(diǎn)擊次數(shù)： 1065次

簡介
高等動物體內(nèi)存在著具有防御功能的吞噬細(xì)胞系，它是由單核細(xì)胞和粒細(xì)胞等白細(xì)胞構(gòu)成，是機(jī)體內(nèi)免疫系統(tǒng)的重要組成部分。在白細(xì)胞中，以粒細(xì)胞和單核細(xì)胞的吞噬活動較強(qiáng)，故被稱為吞噬細(xì)胞。
原理
細(xì)胞吞噬活動觀察實(shí)驗(yàn)的基本原理是單核細(xì)胞由血液進(jìn)入組織后逐漸演變成巨噬細(xì)胞。巨噬細(xì)胞主要靠吞噬作用處理異物；當(dāng)機(jī)體受到細(xì)菌等病原體或其他異物入侵時(shí)，巨噬細(xì)胞首先在趨化因子的作用下向異物移動，然后伸出偽足包裹異物，將異物吞入胞漿內(nèi)形成吞噬泡，隨后溶酶體與吞噬泡融合并消化異物。
材料與儀器
器材：
載玻片、蓋玻片、解剖剪、鑷子、2 ml 注射器、針頭、光學(xué)顯微鏡、小白鼠、蟾蜍。
試劑：

① 6％淀粉肉湯（含 0.3％臺盼藍(lán)）;

② 1％雞紅細(xì)胞懸液

（取雞血 1 ml（肝素抗凝）加入到 99 ml 雞生理鹽水中）;

③小鼠生理鹽水
④雞生理鹽水
⑤蟾蜍生理鹽水
⑥墨汁
步驟
細(xì)胞吞噬活動觀察實(shí)驗(yàn)的基本過程可分為如下幾步：
（一）觀察小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬活動
A 實(shí)驗(yàn)前 2 天，每天向小鼠腹腔注射 6％淀粉肉湯 1 ml（起標(biāo)記作用），以誘導(dǎo)腹腔產(chǎn)生較多的巨噬細(xì)胞（此操作由教師在實(shí)驗(yàn)前完成）。
B 實(shí)驗(yàn)時(shí)，每組取 1 只經(jīng)上述處理過的小鼠，腹腔注射 1％雞紅細(xì)胞懸液 0.5～1 ml（注射時(shí)從小鼠下腹外側(cè)進(jìn)針，呈 45° 角刺入腹腔），然后輕揉小鼠腹部以使細(xì)胞懸液分散均勻。
C 30 min 后，再向腹腔內(nèi)注射 0.5 ml 小鼠生理鹽水，輕揉小鼠腹部，使其腹腔液稀釋。
D 3 min 后，頸椎脫位法處死小鼠。
E 用注射器抽取腹腔液（剪開腹腔，把內(nèi)臟推向一側(cè)，用吸管或不裝針頭的注射器吸取腹腔液），滴片，然后蓋上蓋片。
F 鏡下觀察。
（二）觀察蟾蜍白細(xì)胞的吞噬活動
A 用注射器吸取蟾蜍生理鹽水稀釋墨汁 0.5～1 ml，注射入蟾蜍尾桿骨兩側(cè)的背淋巴囊內(nèi)，將蟾蜍放在室溫環(huán)境中。
B 約 2～3 h 后，用注射器抽取背淋巴囊內(nèi)的淋巴液，滴在載玻片上，加蓋玻片進(jìn)行觀察。
注意事項(xiàng)
1 頸椎脫位法處死小鼠：將小鼠放在實(shí)驗(yàn)臺上，右手抓住鼠尾向后拉，左手的拇指和食指向下按住頭部；此時(shí)雙手的拇指和食指在顱骨和脊椎間同時(shí)向外用力一扽，使顱腦與脊髓分離，從而造成脊髓與腦髓斷離，小鼠會立即死亡。參見圖 4-3。

2 蟾蜍尾桿骨兩側(cè)的背淋巴囊。參見圖 4-4。

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細(xì)胞吞噬活動觀察實(shí)驗(yàn)

（一）觀察小鼠腹腔巨噬細(xì)胞的吞噬活動

（二）觀察蟾蜍白細(xì)胞的吞噬活動