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端粒顯示實(shí)驗(yàn)
發(fā)布時(shí)間： 2022-12-01 點(diǎn)擊次數(shù)： 713次簡(jiǎn)介
端粒（telomere）是真核細(xì)胞染色體末端的 DNA 重復(fù)序列，它與多種端粒結(jié)合蛋白結(jié)合在一起，發(fā)揮重要的生物學(xué)功能，在細(xì)胞分裂的過(guò)程中，盡管端粒也會(huì)不斷的縮短，但可以通過(guò)端粒酶的催化，以自身 RNA 為模板進(jìn)行補(bǔ)充，從而代償了這一損失。
端粒的功能保護(hù)染色體末端完整性，穩(wěn)定染色體，保障染色體 DNA 在復(fù)制的過(guò)程中不被縮短，保護(hù)染色體結(jié)構(gòu)基因，防止基因組 DNA 降解、防止染色體末端融合，調(diào)節(jié)細(xì)胞生長(zhǎng)、衰老等作用。
目前，用于端粒顯示實(shí)驗(yàn)的方法主要有 3 種：Southern印跡法、Q-FISH法和qPCR法。
原理
Southern印跡法檢測(cè)端粒長(zhǎng)度的基本原理是盡管不同物種的端粒的重復(fù)序列可存在差異，在同一種生物體內(nèi)為特定序列，如人端粒是由 6 個(gè)堿基重復(fù)序列（TTAGGG）和結(jié)合蛋白組成。通過(guò)與放射性同位素 32P 標(biāo)記的探針 32P-（TTAGGG）n，檢測(cè)末端限制性片段（terminal restriction fragments，TRF）的長(zhǎng)度分布情況，并計(jì)算出端粒長(zhǎng)度的平均值。Q-FISH法檢測(cè)端粒形態(tài)及長(zhǎng)度的基本原理是盡管不同物種的端粒的重復(fù)序列可存在差異，但在同一種生物體內(nèi)為特定序列，如人端粒是由 6 個(gè)堿基重復(fù)序列（TTAGGG）和結(jié)合蛋白組成。因此，對(duì)于端粒長(zhǎng)度的檢測(cè)，傳統(tǒng)上可以對(duì)上述重復(fù)序列設(shè)計(jì)探針，采用核酸分子雜交技術(shù)進(jìn)行測(cè)量。QPCR法檢測(cè)端粒長(zhǎng)度的基本原理是盡管不同物種的端粒的重復(fù)序列可存在差異，但在同一種生物體內(nèi)為特定序列，如人端粒是由 6 個(gè)堿基重復(fù)序列（TTAGGG）和結(jié)合蛋白組成。因此，對(duì)于端粒長(zhǎng)度的檢測(cè)，傳統(tǒng)上可以對(duì)上述重復(fù)序列設(shè)計(jì)探針，采用核酸分子雜交技術(shù)進(jìn)行測(cè)量?；谝粋€(gè)細(xì)胞中端粒長(zhǎng)度的均值與端粒-單拷貝基因比率（Telomere-to-Single Copy Gene ratio，T/S 比率）有關(guān)的證據(jù)，通過(guò)測(cè)量和計(jì)算出 T/S 比率，從而測(cè)量出端粒的長(zhǎng)度。
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